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超微粉碎對水蛭藥效影響的初步實驗研究
添加時間:2016-04-08    閱讀次數:7436

[摘要] 目的:比較水蛭煎劑、普通散劑的藥效以及新法炮制與超微粉碎對其藥效的影響。方法:用BT-1500型離心沉降式粒度分布儀測定了生、制水蛭超微散的粒度。通過小鼠抗凝血、抗血栓作用,比較了水蛭絲水煎劑1/2煎劑劑量的普通散、超微散、制水蛭超微散的藥效。并對其安全性進行了考察。結果:供試品藥效由強到弱為制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎劑、對照組。結論:水蛭經超微粉碎,尤其是新法炮制后超微粉碎,可明顯改善氣味、口感,提高藥效。

[關鍵詞] 水蛭;新法炮制;超微粉碎;增效

[中圖分類號]  R283.1   [文獻標識碼]B[文章編號] 1001-5302(2001)04-0241-04

水蛭作為經典的破血逐瘀藥,近代在中醫臨床與中成藥生產中得到了愈來愈廣泛的應用,并成為了一種世界性藥物。經前期工作,初步證明水蛭的主流藥用品種為螞蟥(寬體金線蛭Whit mania pigra Whit man);切絲入藥優于《藥典》規定的切段入藥;生用在活血化瘀等藥效方面,優于傳統燙制品;按新法制成的制水蛭能在改善原藥氣味的同時,較好的保存其內在成分,且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循環、降膽固醇等藥效學指標,均優于傳統燙制水蛭,部分指標也優于生水蛭,有保質增效的趨勢[1]。但水蛭在臨床應用中入湯劑味劣難服,易反胃敗胃。臨床中亦有研末或裝膠囊吞服效優的經驗。

近幾年由于超微粉碎技術的發展,可達到使動、植物細胞90%以上破壁的細度。由于粒度的減小,也有利于改善藥物的氣味及服用口感。鑒于水蛭經炮制和超微粉碎后有無藥效與應用方面的優勢,未見報道,筆者對此作了初步的實驗研究。

1實驗材料

1.1供試材料

水蛭購自山東省立醫院,經李定格、李峰老師鑒定為螞蟥(寬體金線蛭Whit mania pigra Whitman)。

1.2供試品制備

水蛭絲:原藥材挑去雜質,擦凈,蓋濕紗布略潤后切2~3mm細絲。在切制過程中發現,部分藥材中間填充有白色結晶性粉末,口嘗無咸、澀味、初步印象為石膏,切絲晾干后過篩可大部脫落。經紫外燈照射45min后密閉備用。

生水蛭水煎液:凈水蛭絲2.6g,加10倍量水浸泡30min,微沸30min,過濾,藥渣加8倍量水,微沸30min,過濾,合并濾液,定容100ml,濃度為26˙ml-1。

生水蛭普通散:凈水蛭絲經粉碎研磨過100目篩。

生水蛭超微散:凈水蛭絲經SQW-6型三清微粉機粉碎。出料溫度35~40℃。

制水蛭超微散:凈水蛭絲酒潤麩制炮制后,SQW-6型三清微粉機粉碎。出料溫度同上。

3種散劑均平鋪一薄層,經紫外燈照射45min后,密切保存備用。

1.3  實驗動物與儀器

昆明種小鼠(山東中醫藥大學動物房提供):SQW-6型三清微粉機;BT-1500型離心沉降式粒度分布儀。

2 實驗方法與結果

1.1水蛭超微散粒度的測定

按《藥典》規定,水蛭普通散的粒度為(150±6)µm。生、制水蛭超微散的粒度經BT-1500型離心沉降式粒度分布儀測定,結果見表1、表面化。實驗表明,生、制水蛭經微粉機粉碎,可使其中位徑分別達到10.24µm和7.79µm;最大粒徑分別為72µm和24.81µm;50%的粒度在10µm和8µm以下,90%的粒度在50µm和23µm以下,確能達到超微的效果,而且經新法炮制后更利于粉碎,其粒度明顯小于生水蛭。

表1生水蛭超微粉粒度分布測試結果

粒徑        區間頻率       累積頻率

/µm           /%               /%

0.00~1.00       3.33            3.30

1.00~2.00       4.70            8.80

2.00~3.00       4.93            12.93

3.00~4.00       5.38            18.32

4.00~5.00       5.27            23.59

5.00~6.00       4.71            28.30

6.00~7.00       5.40            33.70

7.00~8.00       5.79            39.49

8.00~9.00       5.50            44.99

9.00~10.00       4.23            49.22

10.00~11.00       3.86            53.08

11.00~12.00       0.72            53.80

12.00~13.00       0.00           53.80

13.00~14.00       0.78            54.58

14.00~15.00       3.15            57.73

15.00~20.00       10.59            68.31

20.00~30.00       20.19            88.50

30.00~40.00       1.13            89.63

40.00~50.00       1.02            90.65

50.00~60.00       6.19            96.84

60.00~70.00       3.05            99.89

70.00~72.00       0.11            100.00

72.00~73.00       0.00            100.00

73.00~74.00       0.00            100.00

注:中位徑10.24µm   最大粒徑72µm

 

2.2   供試品對小鼠凝血時間的影響取體重(28±3)g的成年雄性小鼠,隨機分為5組。水蛭煎劑組以0.4mg˙g-1劑量灌胃。3種散劑組每天灌胃臨時配成13mg˙ml-1的混懸液,以0.2mg˙g-1的劑量灌胃(煎劑的1/2量)。用生理鹽水作對照。每天3次,連續給藥3d ,第4天給藥1h后,從小鼠眼內毗球后靜脈叢取血,按毛細管法[2],測定各組小鼠的凝血時間,經t檢驗統計分析,結果見表3。實驗表明,水蛭煎劑與水蛭散劑均有確切的抗凝活性。1/2劑量的散劑,其抗凝效果優于湯劑。超微散的抗凝活性有優于普通散的趨勢,制水蛭超微散又明顯優于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增強其抗凝活性。

表2  制水蛭超策粉粒度分布測試結果

粒徑        區間頻率       累積頻率

/µm           /%               /%

0.00~1.00       2.59            2.59

1.00~2.00       4.19            6.77

2.00~3.00       6.51           13.28

3.00~4.00       5.22            18.50

4.00~5.00       12.06            30.56

5.00~6.00       6.20            36.75

6.00~7.00       7.03            43.79

7.00~8.00       6.26            50.05

8.00~9.00       6.85            56.89

9.00~10.00       2.84            59.73

10.00~11.00       3.51            63.24

11.00~12.00       0.64            63.88

12.00~13.00       0.00           63.88

13.00~14.00       0.72            64.60

14.00~15.00       2.77            67.37

15.00~20.00       4.09            71.46

20.00~30.00       4.75            76.21

30.00~40.00       1.99            78.20

40.00~50.00       3.38            81.58

50.00~60.00       2.16            83.74

60.00~70.00       1.92            85.66

70.00~72.00       4.61            90.27

72.00~73.00       6.17            96.43

73.00~74.00       3.57            100.00

注:中位徑7.97µm   最大粒徑24.81µm

 

表3  供銷試品對小鼠凝血時間的影響

組別             n         劑量       凝血時間         p

                         /mg˙g-1        /min

生理鹽水         10        0.4        2.96±1.43

生水蛭水煎劑     13        0.4        4.95±2.32       <0.05()

生水蛭普通劑     14        0.2        6.23±2.73       >0.05()

生水蛭超微散     13        0.2        6.33±2.60       >0.05()

制水蛭超微散     13        0.2        9.38±2.19       <0.01()

注:()示該組與上一組比較

2.3  供試品對小鼠出血時間的影響

取體重(28±3)g的成年雄性小鼠,隨機分為5組。以上法相同劑量給小鼠灌胃3d,每天2次,第4天給藥1h,用剪尾法[2]測定各組小鼠剪尾5mm的出血時間,結果見表4。實驗表明,生水蛭水煎液與對照組相比,雖有作用增強的趨勢但無顯著性差異,而普通散劑組呈顯著性差異,兩種超微散均為極顯著性差異,制超微散更優。

表4  供試品對小鼠出血時間的影響

組別             n         劑量       凝血時間         p

                         /mg˙g-1        /min

生理鹽水         10        0.4        7.95±2.58

生水蛭水煎劑     10        0.4        10.28±3.19       >0.05()

生水蛭普通散     12        0.2        14.32±7.08       <0.05()

生水蛭超微散     12        0.2        15.42±5.09       <0.01()

制水蛭超微散     10        0.2        16.45±4.55       <0.01()

注:()示與NS組比較

2.4 供試品對小鼠體內抗栓作用的影響

抗栓實驗方法學研究認為,在(37±1)℃的生理鹽水中,測定小鼠尾出血時間,與鼠頸動脈旁路血栓形成法具有很好的平行性?勺鳛橐环N簡便易行的抗血栓形成藥物的體內初篩法用于實驗[3]。取體重(20±2)g的雄性小鼠隨機分為5組,以給定劑量灌胃3d,第4天給藥1h后,將小鼠固定,距尾尖3mm處剪斷,垂直放放(37±1)℃生理鹽水中,使尾端在液面下3cm,記錄出血時間,結果見表5。實驗表明,體內抗栓作用,也以超微散為優,但生、制品之間的差異不明顯。

表5供試品對小鼠體內抗栓作用比較

組別             n         劑量       凝血時間         p

                         /mg˙g-1        /min

生理鹽水         10        0.3ml        0.95±0.22

生水蛭水煎劑     10        0.390        1.09±0.25       >0.05()

生水蛭普通散     12        0.195        1.24±0.59       >0.05()

生水蛭超微散     10        0.195        1.66±0.76       <0.05()

制水蛭超微散     10        0.195        1.69±0.53       <0.01()

注:()示與NS組比較

2.4對小鼠安全性的考察

水蛭經炮制和超微粉碎后藥效有所增強,其毒性是否增大?為此考察了供試品對小鼠的安全性。取體重(20±2)g的健康小鼠80只,隨機分為4組,1組給予1300/mg˙ml-1的水煎液,0.4ml/只,3次/d,1.56g˙d-1(相當于《藥典》規定的成人每日湯劑服用量的200倍)。其余3組分別給予130/mg˙ml-1的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散0.3ml/只,3次/d,117mg˙d-1(此為能通過灌胃器的散劑最大劑量,相當于《藥典》規定成人每日服粉末量的30倍),給藥后觀察1周,結果小鼠活動、糞便、毛色正常,無死亡。每組平均體重增加6~8g,說明水蛭經新法炮制和超微粉碎后用藥是安全的。該結果與前期工作和水蛭的亞急性毒性報道[4]相一致,支持臨床中認為“水蛭系療效卓著的無毒品”的觀點。

3 小結與討論

3.1水蛭絲入藥,既有利于其藥物成分的煎 出,又有利于祛除水蛭體內人為摻入雜質,優于《藥典》規定的切段入藥。

3.2 生水蛭經超微粉碎,90%的粒度為普通散的1/4,50%的粒度為普通散的1/15,且顏色變淺,腥味降低,質地細膩,利于吞服。1/2煎劑劑量的抗凝血、抗血栓作用優于水蛭絲煎劑,肯定更優于《中國藥典》2000年版規定的水蛭段煎劑,證明多數臨床經驗認為水蛭服散效優是正確的,利用超微技術將更有利于水蛭藥效的發揮。

1.3水蛭經新法炮制后,有利于矯正其氣味,超微粉碎后其粒度也小于生水蛭,最大粒徑為生水蛭超微粉1/3,僅為24µm。實驗藥效指標在3種散劑中呈最優趨勢,值得進一步深入研究及推廣應用。

1.4雖然藥物粒度的減小,有利于其溶解吸收并改善氣味口感,但也會引起表面能和穩定性等方面的變化。制水蛭超微粉的穩定性及最佳粒度范圍等問題,還有待于進一步研究。

1.5水蛭作為一種世界性藥物,研究最多的品種是日本醫蛭(Hirude nipponica  Whitman),而我國臨床用藥的主流商品是寬體金線蛭。該品種有效部位及有效成分的研究,目前幾近空白。深入研究其成分,將有利于飲片質量的控制和炮制原理的研究,此類探索目前正在進行之中。

[參考文獻]

[1]呂文每,王琦,武繼彪,等.水蛭飲片炮制研究.中藥材,1996.19(4):294

[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學.上海:上?茖W技術出版社,1991.494.

[3]顧云,孟娟如.介紹一種簡易的抗血栓藥物體內篩選法.中國藥理學通報,1991,7(4):317
[4]陳小野,鄒世潔.水蛭的醫學研究概述.成都中醫學院學報.1987,10 (5):51.

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